在液相色譜分析中，不同型號儀器間色譜行為存在差異是普遍存在的現(xiàn)象。而造成同樣色譜條件在不同型號色譜儀器上存在色譜行為差異的諸多原因中，色譜系統(tǒng)延遲體積差異無疑是造成結(jié)果差異的主要原因之一。

可以看到，由于四元低壓梯度模式其梯度混合點在比例閥并早于泵頭，因此整個泵頭的體積都將造成梯度延遲。而二元高壓混合由于混合點在泵后的混合器部分，因此泵頭體積將不會影響梯度延遲。這就是我們通常認為二元高壓的系統(tǒng)體積小，在極端梯度條件下性能更好更穩(wěn)定這一“色譜常識”的底層技術(shù)原因。

那么系統(tǒng)（梯度延遲）體積的不同，會如何影響色譜行為呢？在色譜圖上的直觀變化是什么呢？

上圖是相同的咖啡因標準樣品在不同色譜儀上的色譜圖，可以看到同樣色譜方法下，咖啡因出峰時間相差0.8min左右。經(jīng)過簡單計算可以判斷，保留時間的差別主要是由兩個系統(tǒng)間系統(tǒng)延遲體積相差約750ul帶來的。

保留時間如此明顯的變化為不同儀器間的方法遷移帶來了挑戰(zhàn)。通常情況下，為了在不同系統(tǒng)間轉(zhuǎn)移方法時獲取可比較的色譜圖，我們需要對梯度方法進行調(diào)整以確保保留時間的一致、可比。而方法的變化一般會帶來方法重新驗證等一系列的后續(xù)工作，使得色譜方法遷移過程變成一個“昂貴的問題”。

為了更方便高效地解決類似問題，華譜科儀開發(fā)了梯度起點調(diào)整功能。從此客戶只需粗略了解色譜儀器的系統(tǒng)體積差，通過計算換算成梯度起點調(diào)整的秒數(shù)，即可方便的將方法遷移后的色譜行為（保留時間）調(diào)整到遷移前的類似水平。

以下是一個實際案例：

實驗目的：將在Alliance儀器上開發(fā)的色譜方法遷移到華譜科儀S6000 HPLC上

樣    品：紅參中皂苷

色 譜 柱：Alphasil ES-C18, 4.6×150 mm, 3.5 μm

柱    溫：30 ℃

流    速：1.0 mL/min

進 樣 量：10 μL

檢測波長：203 nm

下載梯度起點調(diào)整說明